产品名称：MMLV逆转录酶/ MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)

产品浓度：200U/μl

贮存条件：-20℃保存，有效期二年。

产品说明：逆转录酶能以RNA或单链DNA为模板起始合成互补的DNA链。MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)是M-MLV逆转录酶的多点突变型，点突变去除了RNase H的活性中心，使RNase H的活性降低，减少了逆转录反应中RNA的降解，并提高了酶的耐热能力，50℃反转录时，保持了100%活性；更容易打开模板的高级结构，使cDNA第一链的得率增加，更容易获得全长cDNA。

来源：E.coli 菌株，含有突变型莫洛尼氏鼠.白.血.病病毒（M-MLV）逆转录酶基因。

活性定义：以Poly(A)为模板，Oligo (dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化掺入1nmol的dTTP所需酶量定义一一个活性单位(U)。

产品应用：第一链cDNA的合成；RT-PCR反应。

储存缓冲液：20 mM Tris-HCl (pH7.5)，200 mM NaCl，0.25 mM EDTA，0.01% NP-40(v/v)，2.5 mM DTT，50%甘油(v/v)。

产品纯度： 200U的本酶和1μg的16S、23S rRNA在37℃下孵育1h，电泳条带无肉眼可见的变化。

反应缓冲液：[5×RT Buffer] 250mM Tris-HCl (pH 8.3)，15mM MgCl2，375 mM KCl，50mM DTT。

推荐的反应条件：

cDNA第一链的合成

1) 在无RNase的PCR管中加入：Oligo dT12-18 (1μg/μl)或基因特异引物2-10pmol或随机引物(50-250ng)1μl；Total RNA (10ng-5μg)或mRNA(1-500ng)xμl；dNTP (10mM each)1μl；DEPC ddOH2 (14-x)μl。

2) 70℃保温10分钟后迅速冰浴2-10分钟。

3) 离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。

4) 向上述反应液中加入：5×RT Buffer 4μl；RNasin (40U/μl) 1μl；轻轻吸打混匀。

5) 50℃保温2分钟（Oligo dT12-18或基因特异引物）；如果是随机引物则25℃保温10分钟。

6) 加入1μl MMLV逆转录酶，混匀后50℃保温50分钟。

7) 70℃ 保温15分钟后置冰上冷却，得到cDNA。该产物可直接用于第二链的合成或RT- PCR扩增反应，保存请置于-20℃。

公 司 信 息

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